紫外可見分光光度計的類型很多,但可歸納為三種類型,即單光束分光光度計、雙光束分光光度計和雙波長分光光度計。
1、單光束分光光度計
經(jīng)單色器分光后的一束平行光,輪流通過參比溶液和樣品溶液,以進(jìn)行吸光度的測定。這種簡易型分光光度計結(jié)構(gòu)簡單,操作方便,維修容易,適用于常規(guī)分析。
2、雙光束分光光度計
經(jīng)單色器分光后經(jīng)反射鏡分解為強度相等的兩束光,一束通過參比池,一束通過樣品池。光度計能自動比較兩束光的強度,此比值即為試樣的透射比,經(jīng)對數(shù)變換將它轉(zhuǎn)換成吸光度并作為波長的函數(shù)記錄下來。
雙光束分光光度計一般都能自動記錄吸收光譜曲線。由于兩束光同時分別通過參比池和樣品池,還能自動消除光源強度變化所引起的誤差。
3、雙波長分光光度計
由同一光源發(fā)出的光被分成兩束,分別經(jīng)過兩個單色器,得到兩束不同波長1和2 的單色光;利用切光器使兩束光以一定的頻率交替照射同一吸收池,然后經(jīng)過光電倍增管和電子控制系統(tǒng),后由顯示器顯示出兩個波長處的吸光度差值。
對于多組分混合物、混濁試樣(如生物組織液)分析,以及存在背景干擾或共存組分吸收干擾的情況下,利用雙波長分光光度法,往往能提高方法的靈敏度和選擇性。利用雙波長分光光度計,能獲得導(dǎo)數(shù)光譜。通過光學(xué)系統(tǒng)轉(zhuǎn)換,使雙波長分光光度計能很方便地轉(zhuǎn)化為單波長工作方式。如果能在1和2處分別記錄吸光度隨時間變化的曲線,還能進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)動力學(xué)研究。